Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身突变到浮现1型号乳癌临床呕吐的成果率在学龄前以前就有很好的描绘，多个胰脏自身突变阳性的学龄前出处70%在血清转换后10在短期内复发乳癌，而随访15年的学龄前这一%-减少到84%。相比之下之下，占多数临床1型号乳癌一半以上的型号1型号乳癌的肺癌机制还很难得到充分的研究。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1型号乳癌的成果：个基底在浮现多种胰脏自身突变时进入第1阶段，浮现血糖异常时进入第2阶段，浮现呕吐时进入第3阶段。一些多发胰脏自身突变阳性的个基底，在1期和2期，成果较慢，并的发展为肺癌的1型号乳癌。我们之前描绘了一三组在首次验证到多种胰脏自身突变试样后将近10年无乳癌的很慢成果者，这三组病患人数少，但特点非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T线或粒基底反其所在成果较慢的病患当中基本不发挥作用，但在更再进一步肺癌和近十年发挥作用的乳癌病患当中很容易验证到。这可能断定，与成果病患相比之下，这些病患自身免疫反其所的缓冲提升。

后期研究断定，尽管缓冲性T线或粒基底(Treg)量正常，但乳癌病患发挥作用一些基本功能弱点，其当中包含对IL-2的反其所并能减低。此外，乳癌病患当中的效其所CD4+T线或粒基底可能对缓冲兼具抵抗性，平庸为效其所T线或粒基底的诱导弱化，连续性产生的Treg和基底外产生的诱导Treg，以及抗原漫长的CD4+T线或粒基底当中IL-2反其所弱化。本研究的用以是描绘了CD4+缓冲性T线或粒基底(Treg)在一小群极较慢成果者当中的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁不限确诊的病患亲属当中检查1型号乳癌的危险因素。我们之前描绘了近十年较慢成果者的特点，他们保持多重胰脏自身突变阳性将近10年，但很难浮现乳癌的临床呕吐，慢性或非同步短暂性自身免疫。随后，10名再次保持无乳癌并愿意提供大量肠道试样的较慢成果者纳入T和B线或粒基底基本功能分析。在现今的研究当中，8名慢成果者(SP三组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的胰脏自身突变阳性。所有的行动者都西北面1型号乳癌成果的1期，尽管一些人随后失掉了胰脏自身突变对某些抗原的阳性反其所，然而，一名病患已经西北面2期将近6年，但很难浮现临床呕吐，一名病患被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集实验室试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析当中对该遗传物质同步进行了单独分析报告。分离外周血单个核线或粒基底(PBMCs)，采用多参数流式线或粒基底练成和T线或粒基底诱导试验分析报告遗传物质当中Treg的频率、基因型号和基本功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和紧接)同步进行无指导聚类分析，分析报告Treg基因型号。

结果：与保健遗传物质相比之下，来自慢成果基底的心灵CD4+T线或粒基底的指导聚类标示出，酪氨酸的心灵CD4+ Treg频率减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达减少有关。一名HbA1c升高的病患与成果较慢者和反之亦然的对照三组相比之下，Treg谱有所完全相同。基本功能分析断定，与保健遗传物质相比之下，来自较慢成果基底的Treg特异性的CD4+效其所T线或粒基底诱导明显损坏。平庸为对效其所CD4+T线或粒基底CD25和CD134传达的诱导减少。

绘出1 深入的基因型号分析标示出，CD4+Treg亚型号在慢成果队列当中减少。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -线或粒基底上。根据标明物传达鉴定出10个元簇:心灵T线或粒基底_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T线或粒基底;HLA-DR + GITR +心灵T线或粒基底;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)采用9个完全相同Treg标明转换成的10个元簇的MST。每个路由表代表者一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由表三组周围制做。每个路由表当中的饼绘出表示单个标明的传达级别。(b)每个元聚类的热绘出，以标示出整基底标明传达。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)转换成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对原侄量为每个metacluster箱侄线或绘出(原侄量> 0.05%)确定为HD和SP三组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T线或粒基底(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T线或粒基底(l)。深橙色格侄代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检查和。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 采用CITRUS的预报号证实，Treg频率的减少是成果较慢的字样。这两项特异性(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP行动者和反之亦然的HD行动者在CD4+CD45RA−T线或粒基底上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的代表者性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR传达同步进行分离，实时FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及遗传物质SP 606(深橙色)当中CD25+ cd127的频率汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+特异性闭包的箱侄线或绘出;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度图例，标明引人注目的簇被识别为SP和HD队列两者之间的完全相同。(j)箱侄线或绘出标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对原侄量(%-)。(k)直方绘出标示出每个簇的基因型号(黑色)和Treg标明相对传达与背景传达(橙色);上列，闪存Treg_3;示例一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇当中标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检查和

绘出3 与保健献血者相比之下，成果较慢者心灵treg的GITR减少。每个心灵CD4+T线或粒基底元簇(心灵T线或粒基底_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T线或粒基底;HLA-DR + GITR +心灵T线或粒基底;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个传达标明的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热绘出(sp606不包含在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)的FlowSOM GITR传达并联，标示出直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon一组符号秩和检查和，p< 0.07(深橙色)所有遗传物质包含，p< 0.05(橙色)遗传物质SP 606和反之亦然的HD不包含在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR传达，从这两项特异性，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(深橙色)并联，标示出直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩检查和

绘出4 来自较慢成果的CD4+ treg线或粒基底控制效其所CD4+T线或粒基底的并能减低。SP三组用橙色的线或和格侄表示，HD三组用黑色的线或和格侄表示，深橙色的线或/格侄表示遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒基底同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标明为CFSE, Treg按检视的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠酪氨酸线或粒基底，培养3天后同步进行流式线或粒基底练成验证。(a-d)与CD4+接收者者相对其所的treg培养(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱导%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导%-。采用阳性对照(酪氨酸的响其所线或粒基底不含treg)计算诱导%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 效其所CD4+T线或粒基底对较慢成果的T线或粒基底酪氨酸的诱导更引人注意。SP三组用橙色的线或和格侄表示，HD三组用黑色的线或和格侄表示，深橙色的线或/格侄表示遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线或粒基底同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标明，treg按检视的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠酪氨酸线或粒基底，培养3天后同步进行流式线或粒基底练成(CD25反染)和线或粒基底因侄分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培养。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱导%-(b)。(c,d) CD25诱导%-(c)和CD134诱导%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计当中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较慢成果侄的酪氨酸心灵CD4+Treg在GITR传达当中得到了扩充和丰富，强调了再进一步研究Treg在1型号乳癌风险个基底当中的系统性的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28